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    感覺態(tài)細胞的儲存和制備注意事項

    點擊次數(shù):4461  更新時間:2023-01-26
       感覺態(tài)細胞的儲存:
      每次轉化時使用新鮮的細胞是明智的,因為長時間儲存,轉化效率會降低,但這并不總是可行的。
     
      感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長達一年,沒有轉化潛能的損失。然而,瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的。需要在冷凍保護劑中,像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。
     
      使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。
     
      用紙片等將盒子里的細胞管隔開,分成多個小格子。
     
      復蘇過程中,在37°C解凍細胞,轉化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。
     
      感覺態(tài)細胞的制備注意事項:
      1、配制溶液的水受有機污染,會降低感受態(tài)的轉化率;
     
      2、液氮速凍可以提高轉化效率約5倍;
     
      3、甘油會使細菌沉淀附著力降低;
     
      4、感受態(tài)細胞是很脆弱的,實驗操作過程中,動作要輕;
     
      5、制備感受態(tài),所用的試劑及器具的潔凈程度要求高;操作要求嚴格;轉化效率高;
     
      6、為達到高轉化效率,活細胞數(shù)需少于108個細胞/ml;
     
      7、不同菌株之間,OD600的數(shù)值與每毫升中活細胞數(shù)間的關系很大;
     
      8、在大腸桿菌生長曲線上,在生長初期和末期兩個時期獲得較高轉化率;
     
      9、有實驗曾表明,可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h,在起初保存的12-24h內,轉化效率會有所提高,然后降低到初始水平;
     
      10、對于克隆用途來說,每份細胞體積有50μl足矣;
     
      11、玻璃管會降低轉化率約10倍。
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